肉的宰后嫩化突出归因于肌原钎维空间结构类型的影响，肌原钎维空间结构类型是由内源性淀粉酶溶解酶分解肌原钎维和血组织上皮内部系骨架淀粉酶导致的。与数五年来总是是关心主角的钙淀粉酶酶差异，胱天淀粉酶酶（caspases）近期成為感爱好情况下题。胱天淀粉酶酶在血组织上皮内部系凋亡的运行第一阶段起着至关很重要的意义，这当中caspase-3在去逝淀粉酶溶解中的意义是相互面和僵化的，由此最该进每一步设计。S-亚硝基化凭借调高钙增加、精力新陈代谢、淀粉酶质分解和血组织上皮内部系凋亡来调高肉质地，还有嫩度和持水水平。事前设计发觉S-亚硝基化能降低依靠线粒体的caspase-3级联现象，这能够是健身肌肉血组织上皮内部系凋亡和鸡肉品质质量转变 的因素。caspase-3的设计突出是其与血组织上皮内部系凋亡的相互关系，其实，很小有设计浅论S-亚硝基化调高caspase-3的新机制。

2024年9月由杭州林果业大家张万刚讲解开发团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物技术为该研究提供了亚硝基化掩盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名字微信标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

刊物：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年印象分子：5.7

公布时期：2024年9月

业主院校：南京农业大学

研发村料：蛋白

拜谱提供了技艺：亚硝基化修饰组学

枝术线路：

一、科研但是

01.Caspase-3可溶性

迄今为止尚不清除NO对caspase-3的调控的功效会不归因于NO介导的S-亚硝基化，不同的密度梯度方向的GSNO对于外源性NO出售，以帮助caspase-3的离体S-亚硝基化。报告意味着，与没GSNO的组想必，100、200和400μM GSNO组的caspase-3吸附性强势大大减少（图1），与此前媒体报道不对。GSNO进行处理大大减少caspase-3吸附性的存在愿意仍存在不足展现。

图1 有所不同有机废气浓度的GSNO处里对caspase-3活力性的作用

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层度

钻研Caspase-3的亚硝基化层面，以体现了GSNO对Caspase-3的化学反应性。经GSNO治理后，检则到caspase-3蛋清S-亚硝基化构造添加（图2）。这部分导致表述，外源性GSNO培养出来可成功创业分析caspase-3的身体外S-亚硝基化。最让人目瞪口呆的是，在都没有GSNO存有的照表组中检则到有一个绚烂的S-亚硝基化带，这表述caspase-3能够發生内源性的S-亚硝基化。显然，本钻研中caspase-3的S-亚硝基化层面较高，而caspase-3的生物影响，这与开始之前的钻研不对。尽管，caspase-3的特男人S-亚硝基化掩盖位点尚不清晰，还都要进一点的探索世界。

图2 GSNO处理对caspase-3S-亚硝基化总体水平的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码字段。天蓝色符号图片的编码字段觉得S-亚硝基化肽，红颜色符号图片的C觉得S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结蛋白酶

结核蛋清酶做为另一种首要的血生殖细胞骨架核蛋清酶，在恢复肌血生殖细胞设计的设计完正性和抽缩性各方面起着首要用处，论述S-亚硝基化caspase-3对结核蛋清酶可可降解的比较辨别力的更具首要作用。与Std（未用胱天核蛋清酶酶-3和GSNO孵育的起始肌人造植物纤维核蛋清酶）组差距，0 μM GSNO组（肌原人造植物纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完正结核蛋清酶成分偏态下降，警告caspase-3对结核蛋清酶更具自身的核蛋清酶水解反应工作能力。在GSNO孵育后，完正结核蛋清酶的成分分明增高（P < 0.05）。再者，当GSNO溶液浓度增加时，完正结核蛋清酶的成分持续不断上涨（P < 0.05）（图5）。一种得知发现，SNO修饰语的caspase-3以情况根据的具体方法抑制性结核蛋清酶的可可降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3降解塑料结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3光降解肌钙球蛋白-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清缓解负责管理身体肌肉收宿的丝条的一定肌原食物黏胶纤维素蛋清。TnT的溶解有特点是查测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化要求下，caspase-3对TnT的溶解情况下图甲6右图，与Std组（只含caspase-3和GSNO的肌原食物黏胶纤维素）相比较，caspase-3组中30 kDa TnT细节描写取得提升，意味着caspase-3参入了TnT的溶解，再者，caspase-3与GSNO的孵育造成30 kDa TnT下跌。在100和200 μM GSNO组互相找不到查测到看不出的对比(P > 0.05)，而当GSNO的溶度满足400 μM 时，该细节描写取得少(P < 0.05)。此类出现 意味着了SNO装饰的caspase-3对TnT溶解的克加工用。结蛋清和TnT是caspase-3的过敏底物，而GSNO处里大幅度减小caspase-3的催化活性氧机会造成肌原食物黏胶纤维素蛋清溶解水平大幅度减小。所写所写，NO帮助的S-亚硝基化行在装饰半胱氨酸残基来缓解caspase-3的催化活性氧，随之进那步损害其对结蛋清和TnT的蛋清溶解作用，然而损害鸡肉品質。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人总结

本研究分析指在研究综述S-亚硝基化对caspase-3装饰语的危害举例随后不久对牛羊肉肌原食物仟维身体可降解的危害。球蛋白质酶S-亚硝基化需要装饰语caspase-3的半胱氨酸残基，于是造成caspase-3催化活性降，进一大步可抑制了其对牛羊肉肌原食物仟维球蛋白质酶的球蛋白质酶淀粉水解学习能力。

三、拜谱个人心得体会

研发选择了酶活检验，亚硝基化装饰组学深入分析，WB等检验方式方法，察觉到淀粉酶S-亚硝基化是可以装饰caspase-3的半胱氨酸残基，这出现了caspase-3亲水性的减轻，相结每一步治理和改善了其对牛羊肉肌原植物纤维淀粉酶的淀粉酶油脂水解作用。本研发为回答淀粉酶质亚硝基化对吃起来的调节逻辑给出好几回个新的角度 。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、绘制淀粉酶质组学、分泌组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸款型的产品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total被氧化替换、氧化钙含量巯基，欢迎大家咨询！

参考资料文献资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663